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羧酸酯酶(CarE)測試盒-實驗原理

更新時間:2021-04-22      瀏覽次數:1287

羧酸酯酶(CarE)測試盒-實驗原理

 

測定意義:哺乳動物CarE,也稱脂族酯酶(aliesterase),廣泛分布于組織和器官,屬于絲氨酸水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內源性與外源性物質水解,但不能催化水解乙酰膽堿及其類似物。CarE參與脂質運輸和代謝,并且與多種藥物、環境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關,有機磷農藥可結合并且抑制CarE活性。

測定原理:CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固籃顯色;在450 nm光吸收增加速率,計算CarE活性。

需要的儀器,耗材:紫外分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍和蒸餾水。

樣本處理

細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每200萬細菌或細胞加入400μL提取液, 超聲波破碎細胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復30次);然后15000rpm,4℃,離心10min,取上清(若上清 不夠澄清,建議重復上述離心步驟),置于冰上待檢。

組織:按照組織質量(g): 提取液體積(mL)為1 : 5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進 行冰浴勻漿。15000rpm,4℃,離心10min,取上清(若上清不夠澄清,建議重復上述離心步驟),置于冰上待檢。
 

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